蛋白质的检测

2017-07-26 作者:爱格森 浏览数:
        蛋白样品提取是蛋白定量和分析的基础。天然蛋白质分子结构、化学性能各异,选择适当的细胞裂解液制备蛋白样品至关重要。选择细胞裂解液时,除了要考虑蛋白产量,还要考虑所选择的一抗的是否能识别线性的抗原表位。一些含有十二烷基硫酸钠(SDS)和强离子去污剂(如脱氧胆酸钠等)的蛋白质裂解液能够从组织或细胞中提取出大量的蛋白质,适用于PAGE,Western blot等检测;但由于这类裂解液易使蛋白变性,因而不适于免疫共沉淀(Co-IP)等实验。当使用某些只能识别非变性的抗原表位的抗体时,应该选择不含去垢剂或含有较温和的非离子去污剂(如NP-40,Triton X-100等)的裂解液,而不能使用含有SDS和强离子去垢剂的蛋白质裂解液。
 
 
        不同浓度Tris-Glycine凝胶的最佳线性分离范围
    
        免疫印迹法(Western blot)是鉴定蛋白质和多肽,以及检测蛋白表达水平常用的手段。该技术通常是将经过PAGE分离的蛋白质或多肽分子转移到固相载体(PVDF膜或硝酸纤维素膜)上,通过目标蛋白的特异性抗体(一抗)进行免疫反应,再与酶标记的第二抗体(二抗)反应,经过底物显色或发光,从而检测到特异性目的蛋白。

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